大肠杆菌是生物医药领域中最常用的工程菌之一，因其快速生长、培养成本低以及成熟的基因克隆表达系统而受到广泛应用。其质粒被广泛用作基因工程的载体，在分子克隆、疫苗研发和重组蛋白类药物生产等领域都有显著的贡献。然而，在生产相关生物制品时，内毒素的残留水平需要得到严格控制。

内毒素简介

内毒素位于革兰氏阴性菌的细胞壁外层，主要由磷脂-多糖-蛋白质复合物构成，其中毒性成分主要为类脂A。内毒素在菌体死亡或通过人工方式破坏其细胞时释放，并能够直接作用于人体，激活宿主细胞内的炎性反应，导致发热和全身性炎症反应，甚至引发弥散性血管内凝血和多脏器功能衰竭等严重病理症状。因此，内毒素被称为“热原”，其生物活性非常强，即使是微量也能引起显著的炎症反应。内毒素耐热性和稳定性较好，在60℃下加热数小时也不会被破坏，只有在180℃高温下加热超过3小时才能完全灭活，且一般的化学药品对其活性影响有限，只有强酸、强碱或强氧化剂能破坏其结构。

内毒素的检测方法

内毒素可以通过与特定检测试剂反应来检测。常见的检测方法包括凝胶法、重组C因子法和动态比浊法等。凝胶法基于鲎试剂中的C因子的特性，该因子对内毒素敏感，能够结合并激活导致血凝级联反应的发生。此方法操作简单，不需要光学检测仪，但检测范围有限。随着对鲎的保护和重组技术的发展，新一代人工合成的重组C因子被引入内毒素检测中。在激活后，重组C因子可以与荧光底物反应生成荧光信号，其强度与内毒素浓度成正比，从而实现对内毒素含量的定量检测，此方法特异性高，适用于β-葡萄糖干扰的样品。动态比浊法使用光学检测仪监测混合物的OD值和浊度变化速率，可以有效追踪产品质量并提供风险预警。

内毒素的去除方法

鉴于内毒素的危害性，FDA等机构对其控制提出了明确要求。要从源头消除外源性内毒素的污染，确保与样品接触的设备、容器、储液袋、原辅料及耗材经过严格的消毒和灭菌处理。对于内源性内毒素污染，可从样品制备工艺入手，采用离子交换层析法、疏水层析法和特异性吸附等方法进行去除。

离子交换层析法通过改变缓冲液的离子强度或pH值，利用目标产物与内毒素的带电性质差异实现分离。疏水层析法则利用内毒素在高盐条件下的聚集特点进行去除，而特异性吸附则通过将多粘菌素B偶联至层析介质上特异性吸附内毒素，流动相中的蛋白不被吸附而被收集。虽然此方法去除内毒素效果良好，但也存在一定的蛋白损失。还有通过凝胶过滤层析和切向流膜过滤等技术，根据内毒素在不同水溶液中的聚集体分子量差异进行去除。

在生物医药领域，内毒素的控制与去除极为重要，影响着患者的安全和药物的有效性。选择合适的检测和去除方法，确保产品质量，正是实现生物安全的重要一步。尊龙凯时(中国区)相信，通过不断提高技术水平，能够更好地服务于生命科学领域，推动生物医药的进步与发展，成就更加美好的未来。